Blutabnahme Untersuchungsmaterial Vollblut, EDTA, Plasma und Serum

Vollblut

Vollblut sollte nach dem Ausgerinnen, d. h. nach 20-30 min stehender Ruhephase, für die Bestimmung von Kalium oder Phosphat zentrifugiert werden, da ansonsten in vitro-Stoffwechselvorgänge wie z.B. Glykolyse stattfinden. Die Lagerung einer Vollblutprobe über 48 h bei 23 °C führt zu einem Abfall der Glukosekonzentration um 54 % und zu einem Anstieg des Phosphats um 90 %.

Auch Kalium kann sich erheblich im Plasma / Serum anreichern, daher sollte das Plasma/ Serum nach 20-30 min von den Zellen abgetrennt werden. Durch Zusatz von Inhibitoren kann die Glykolyse unterbunden werden, so dass Glukose-, Laktatkonzentrationen und pH-Wert der Probe länger stabil bleiben.

Achtung: Unzentrifugiertes Blut im Serum-Entnahmegefäß nicht im Kühlschrank aufbewahren. Aufgrund der Temperaturabhängigkeit der Na- / K-ATPase kommt es beiTemperaturen < 4 °C und > 30 °C zu einer Freisetzung von Kalium aus den Zellen.

EDTA-Blut für die Hämatologie

EDTA-Blut für Blutbilder

  • EDTA-Blut für das kleine Blutbild ist bei Raumtemperatur 24 h stabil
  • EDTA-Blut für das große Blutbild (Differenzierung mit einem Hämatologieautomaten) erfordert Proben, die möglichst nicht älter als 8 h sind und bei Raumtemperatur gelagert wurden

EDTA-Blut für die Blutgruppenserologie

  • das EDTA-Blut für die Blutgruppen–und Antikörperbestimmung ist maximal 5 Tage stabil
  • die Röhrchen müssen zusätzlich zum Barcode mit Namen, Vornamen und Geburtsdatum des Patienten beschriftet sein

Gewinnung von Serum aus Vollblut

  • Blutentnahme: Röhrchen mit gerinnungsfördernden Zusätzen (Kügelchen, ...)
  • Probe gut durchmischen: fünfmal um 180° kippen
  • Probe stehend 20-30 min ausgerinnen lassen
  • Zentrifugation: nach abgeschlossener Gerinnung 10 min bei 2000 × g
  • anschließend Trennung von zellulären Bestandteilen, wenn Röhrchen ohne Trenngel verwendet werden – Überstand ohne Gerinnungsfaktoren (außer Kalzium)

Gewinnung von Plasma aus Vollblut

  • Blutentnahme: Röhrchen mit gerinnungshemmenden Zusätzen (EDTA, Citrat, NaF, Na-, NH4-, Li-Heparin, ...)
  • Probe gut durchmischen: fünfmal um 180° kippen
  • Zentrifugation: sofort möglich; 15 min bei 2000 × g
  • anschließend Trennung von zellulären Bestandteilen – Überstand enthält Fibrinogen und andere Gerinnungsfaktoren

Achtung: Bei Plasma-Gewinnung aus Original EDTA-Röhrchen immer das benötigte Volumen aus dem EDTA-Röhrchen in separates Gefäß überführen und erst dann zentrifugieren, da sonst das Mischungsverhältnis in dem Ursprungsröhrchen nicht mehr gegeben ist und falsche Werte produziert werden.

Serum und Plasma

Allgemeine Lagerungs–und Versandbedingungen

  • Kühlung: Serum / Plasma muss unmittelbar nach der Zentrifugation gekühlt werden (4-8 °C)
  • Einfrieren: Material darf nur einmal eingefroren werden und die Kühlkette darf nicht unterbrochen werden. Transport in speziellen Kühlakkus
  • Lichtschutz: Lichteinwirkung kann u.a. zu einem Abfall von Bilirubin, Porphyrinen, Folsäure, Vitamin A, E, C, K, B1, B2 und B6 führen, Proben vor Lichteinwirkung schützen

Richtgrößen zur Stabilität

Enzyme Stabilität:

Gekühlt bis zu 5 Tage ohne Abweichung von mehr als 10 %

Ausnahmen:

  • LDH (Aktivität nimmt aufgrund der Kältelabilität von LDH3 und LDH4 ab)
  • saure Phosphatase (ist nur angesäuert stabil)

Substrate Stabilität:

Gekühlt bis zu 6 Tage ohne wesentliche Veränderungen

Ausnahmen:

  • Triglyceride, von denen endogene Lipasen Glycerin abspalten
  • Elektrolyte, LDH, Bilirubin: Stabilität bis 24 Stunden
  • Blutfette, Folsäure, Vitamin B12: Stabilität bis 48 Stunden

Plasmaproteine, Immunglobuline und spezifische Antikörper (z.B. Infektionsserologie) Stabilität

Gekühlt bis zu einer Woche

Ausnahme:

  • Gerinnungsuntersuchungen

Hormone und Tumormarker Stabilität:

Bei Raumtemperatur über 3 Tage

Ausnahmen:

  • NSE muss gekühlt eingesandt werden
  • wenn die Analytik für die Bestimmung von Peptidhormonen (insbesondere: ACTH, Renin, vasoaktives intestinales Peptid, Proinsulin und Calcitonin) nicht taggleich erfolgen kann, muss das Material gefroren eingesandt werden
  • First Trimester: Das Vollblut ist gekühlt 6 Stunden stabil, abzentrifugiertes Serum ist gekühlt 24 Stunden stabil, sollte eingefroren verschickt werden

Röhrchen mit Trenngel

Trenngele bilden nach der Zentrifugation zwischen Serum bzw. Plasma und den Blutzellen eine stabile Trennschicht, die folgende Vorteile bietet:

  • längere Haltbarkeit bei 4-8 °C ohne störenden Einfluss durch die Zellen (wie z.B. Glukoseabbau oder Kaliumfreisetzung)
  • höhere Materialausbeute in verbesserter Qualität
  • verminderte Verwechslungs–und Infektionsgefahr
  • bei korrekter Durchführung keine Nachgerinnung

Achtung: Serum erst nach Abseren einfrieren!

Beim Einsatz von Trenngelen für klinisch-chemische Bestimmungen gelangen selbst nach Tagen keine Zellinhaltsstoffe in das Serum.